先來(lái)看看或參考一下
對(duì)常見(jiàn)的生化項(xiàng)目可以按以下順序安排檢測(cè)
P、Alb、DBIL、TBIL、K、Ca、CK、TBA、TG、AFU、ALT、CK-MB、APOA1、T-CH、APOB、Cl、HDL-C、LP(a)、AST、GPDA、AMY、LDL-C、BUN、UA、CHE、ADA、r-GT、Mg、Na、ALP、LDH、GPDA、TP、Cr。
我們平時(shí)有關(guān)注過(guò)這個(gè)問(wèn)題吧,可能大多數(shù)同行們都沒(méi)有太注意吧,為什么要這樣做,如何排查是否存在這個(gè)問(wèn)題以及有問(wèn)題時(shí)怎么解決呢?一起來(lái)看一下吧。。。。。。
試劑中含有下一個(gè)檢測(cè)所要測(cè)定的底物,或是含有的某種試劑成分與下一反應(yīng)的底物有作用,因而直接干擾下一反應(yīng)的測(cè)定結(jié)果;另一種原因是該試劑所引導(dǎo)的反應(yīng)對(duì)下一個(gè)項(xiàng)目的反應(yīng)進(jìn)程帶來(lái)間接的干擾,因?yàn)樵谟性噭┪廴镜那闆r下,下一個(gè)測(cè)試所測(cè)定的是前后兩個(gè)項(xiàng)目反應(yīng)的綜合作用結(jié)果。部分已知的常用試劑間可能產(chǎn)生的相互干擾如下:
1、pH值改變:試劑中反應(yīng)緩沖液之間因儀器攜帶污染而使下一反應(yīng)的pH值改變,使下一反應(yīng)達(dá)不到最佳狀態(tài)。如雙縮脲法測(cè)血清總蛋白,若其他條件相同,反應(yīng)在堿性(pH值8-9)條件時(shí),蛋白肽鍵(—CONH)才都能與堿性銅溶液作用生成紫色反應(yīng),完全測(cè)出血清蛋白的總量。若pH<8時(shí),總蛋白測(cè)定結(jié)果偏低,直接影響球蛋白、白蛋白/球蛋白的結(jié)果。酶活力測(cè)定在最適pH值時(shí),反應(yīng)最快,靈敏度最高,但是因?yàn)榫彌_能力有限,可因攜帶污染使酶促反應(yīng)出現(xiàn)無(wú)效值。大多數(shù)酶反應(yīng)pH值在6.0-7.5之間;ALP、γ-GT、LDH須在堿性條件下最適宜。
2、TG、T-CH、UA、MG試劑中含有膽酸鹽,對(duì)循環(huán)酶法測(cè)定膽汁酸能產(chǎn)生嚴(yán)重干擾。
3、ALT(IFCC)、AST(IFCC)試劑中含有高活力LD成分,有可能會(huì)對(duì)LD的測(cè)定帶來(lái)干擾。
4、CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)試劑中含有Glu成分,其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反應(yīng)過(guò)程,因此可能對(duì)Glu測(cè)定帶來(lái)干擾,尤其對(duì)Glu的HK法測(cè)定可能帶來(lái)嚴(yán)重干擾。
5、Glu(HK)、CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)、TG、HDL-C、LDL-C(直接法)等試劑中使用了鎂鹽,可能會(huì)對(duì)其后的Mg2+ 測(cè)定帶來(lái)干擾[2];TP試劑中高濃度的Cu2+對(duì)Mg2+測(cè)定也會(huì)產(chǎn)生干擾。
6、ALT、AST、LDH、CK、CK-MB、UA、r-GT、TP,LDH等試劑由于試劑中含有K+或者與K+的酶法測(cè)定有相同或相反的進(jìn)程,對(duì)K+的酶法測(cè)定產(chǎn)生干擾。
7、ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、 UA(Uricase)、α-HBDH(DGKC)等試劑使用磷酸緩沖液,可能會(huì)對(duì)無(wú)機(jī)磷的測(cè)定帶來(lái)干擾。
8、Mg2+試劑(Calmagite)中含有EGTA成分,為Ca2+絡(luò)合劑,可能對(duì)Ca2+的測(cè)定帶來(lái)干擾。
9、CK檢測(cè)不應(yīng)在ALP、Ca檢測(cè)之前,因CK反應(yīng)液中加入EDTA-Na,能抑制ALP活性,結(jié)合Ca而使結(jié)果偏低。
10、BUN酶法測(cè)定因谷氨酸脫氫酶(GLDH)消耗NADH,不能放在底物NADH如ALT、AST項(xiàng)目前檢測(cè)。
事實(shí)上各個(gè)廠家所提供的產(chǎn)品說(shuō)明書常不能夠全面反映試劑組成的情況,而生化反應(yīng)的影響因素又是相當(dāng)復(fù)雜的。因此,通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)試劑交叉污染可能帶來(lái)的干擾顯得更加重要。具體可以通過(guò)以下幾個(gè)試驗(yàn)來(lái)排查和發(fā)現(xiàn)試劑間可能發(fā)生的干擾。
1、將某一試劑作為樣本進(jìn)行全套項(xiàng)目測(cè)定,考察結(jié)果的情況,進(jìn)而確定發(fā)生試劑交叉污染時(shí)造成直接干擾的項(xiàng)目;雙試劑的R1、R2兩種都要做,這樣在解決干擾時(shí)有針對(duì)性。
2、1份樣本分為兩份,一份加生理鹽水或其他適當(dāng)?shù)南♂屢?,另一份加等量的試劑,同時(shí)測(cè)定、考察結(jié)果的變化,進(jìn)而確定可能發(fā)生試劑交叉污染時(shí)造成干擾的項(xiàng)目。
3、懷疑A項(xiàng)試劑對(duì)B項(xiàng)目存在干擾,可以用樣本先單做B項(xiàng)目若干次;然后先做A項(xiàng)目,接著做B項(xiàng)目若干次。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,可以知道A試劑通過(guò)試劑針對(duì)B項(xiàng)目的干擾程度。
通過(guò)以上常見(jiàn)試劑間相互干擾的原因的分析及試劑干擾的排查的試驗(yàn),應(yīng)可以有針對(duì)性采取一些措施消除試劑間的干擾,常用的方法有下面幾種:
1、為減少試劑間的相互干擾,應(yīng)定期對(duì)儀器進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋pB(yǎng),如更換管道,用去污劑、酸性洗液清洗比色杯,用去污劑擦清試劑針,用苯甲醇擦洗攪拌棒等。
2、合理安排檢測(cè)項(xiàng)目的順序:一般在安排項(xiàng)目順序時(shí)要求兩個(gè)項(xiàng)目間至少要有一個(gè)非干擾項(xiàng)目,而最徹底的做法則是將被干擾項(xiàng)目置于干擾項(xiàng)目之前,以消除干擾發(fā)生的可能。同時(shí)要求檢驗(yàn)人員對(duì)儀器的工作狀態(tài)要了如指掌,并在一個(gè)樣本的項(xiàng)目選擇或一個(gè)樣本的最后一項(xiàng)與下一樣本的第一個(gè)項(xiàng)目選擇時(shí)對(duì)于試劑交叉污染的可能性加以考慮,合理安排項(xiàng)目順序,以便得到更為合理的結(jié)果。
對(duì)常見(jiàn)的生化項(xiàng)目可以按以下順序安排檢測(cè):
P、Alb、DBIL、TBIL、K、Ca、CK、TBA、TG、AFU、ALT、CK-MB、APOA1、T-CH、APOB、Cl、HDL-C、LP(a)、AST、GPDA、AMY、LDL-C、BUN、UA、CHE、ADA、r-GT、Mg、Na、ALP、LDH、GPDA、TP、Cr。
3、一些生化分析儀還有額外的沖洗功能,可以在被干擾項(xiàng)目檢測(cè)前對(duì)試劑針,比色杯用酸性洗液、堿性洗液進(jìn)行2次或多次沖洗,以減少項(xiàng)目間的交叉污染。
4、有的全自動(dòng)化分析儀器有不同的通道,可以將有干擾的項(xiàng)目排在不同的通道中檢測(cè)。
5、選用具有抗交叉污染的試劑盒:如在游離膽固醇試劑中添加膽固醇酯抑制劑,以減少膽固醇酯酶水解膽固醇酯引起對(duì)游離膽固醇測(cè)定的污染。
通過(guò)以上幾種方法,大部分試劑間的交叉污染能夠被解決,實(shí)際工作中,用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行連續(xù)的多個(gè)項(xiàng)目的測(cè)定,每個(gè)反應(yīng)的詳細(xì)過(guò)程難以探知,因此要求我們?cè)趯?shí)際工作中必須對(duì)生化分析儀的工作原理,方法,流程,狀態(tài)非常了解,還須對(duì)試劑的組成,反應(yīng)原理作深入的分析,理論分析結(jié)合實(shí)際應(yīng)用,方可以摸索出一套符合本單位工作的方法。
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